鱟試驗法中藥物與醫(yī)療器械的熱原允許含量問題

盡管鱟試驗應(yīng)用于許多領(lǐng)域的內(nèi)毒素檢測，確實取得了許多成績，解決了不少實際問題。但仍存在不少問題，本文主要講解藥物與醫(yī)療器械的熱原允許含量問題。

由于很小劑量的內(nèi)毒素即能引起機(jī)體產(chǎn)生一系列生物效應(yīng)及病理效應(yīng)，而許多藥物（包括大輸液、靜脈注射劑、口服藥物、放射性同位素、各類生物制劑），在其原料、制備過程及制備后的各個環(huán)節(jié)，或多或少地受到內(nèi)毒素污染。各類醫(yī)療器械由于消毒不嚴(yán)格（內(nèi)毒素需120℃4小時才能*破壞）亦可受到內(nèi)毒素的污染。所以檢測藥物及醫(yī)療器械內(nèi)毒素的含量，以便有效地采取控制內(nèi)毒素的含量的措施，使顯得具有重要的實際意義。對此問題盡管國內(nèi)外組織了許多人力物力進(jìn)行研究，并提出了許多有參考價值的意見，但國內(nèi)外許多專家、廠家對此仍有甚多不同的意見。

1.藥物方面

藥物內(nèi)毒素的允許含量是多少？其根據(jù)是什么？目前對此問題仍未有一個滿意的回答。以人類內(nèi)毒素允許接受限-量作為藥物內(nèi)毒素允許含量的參考較為適宜。而發(fā)熱為機(jī)體對內(nèi)毒素反應(yīng)最為敏感的現(xiàn)象之一，且發(fā)熱亦最易判斷，因此可將藥物發(fā)熱的閾值劑量作為內(nèi)毒素允許含量的上限。

早在1961年Keene等即觀察到30ng /kg從衰敗沙雷氏菌提純的內(nèi)毒素為引起人發(fā)熱的闞值點，所以對此種內(nèi)毒素，閾值劑量即為30ng/kg，人類應(yīng)用30ng/kg以下是安全的。

1980年1月18日美國食品藥物管理局起草了“鱟試驗法定作為人、獸用藥及醫(yī)療器械終產(chǎn)品試驗準(zhǔn)則"，并規(guī)定對于大多數(shù)藥物（不包括大輸液及鞘內(nèi)注射劑），以重量/公斤（人體重）計算，如產(chǎn)品內(nèi)毒素含量≤0.5ng/kg，則此產(chǎn)品可以允許出廠，但是沒有明確的數(shù)據(jù)支持此規(guī)定。為此Pearson等應(yīng)用流產(chǎn)沙門氏菌、福氏痢疾桿菌、衰敗沙雷氏菌、綠膿菌、克氏桿菌等的內(nèi)毒素測定了其對于家兔的閾值劑量值。事實上，家兔與人體內(nèi)毒素的反應(yīng)較為一致，家兔比人對內(nèi)毒素更為敏感，因此試驗結(jié)果是確實，而可應(yīng)用于人。這些細(xì)菌對內(nèi)毒素的閾值劑量值分別為:

流產(chǎn)沙門氏菌內(nèi)毒素：稍大于1.0ng/kg；

福氏痢疾桿菌內(nèi)毒素：2.0ng/kg；

衰敗沙雷氏菌內(nèi)毒素：15ng/kg；

綠膿桿菌內(nèi)毒素：370ng/kg；

參考標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒為1.43ng/kg。從這些結(jié)果來看，細(xì)菌內(nèi)毒素的閾值劑量均為1.0ng/kg以上。

在1977～1979年間，上述作者檢查了530371份制備過程中的半成品及終產(chǎn)品的內(nèi)毒素含量，內(nèi)毒素為0.05~0.2ng/ml的有489份，＞0.2ng/ ml有70份。在內(nèi)毒素含量為0.05～0.2ng/ml的489份標(biāo)本中，僅有13例家兔熱原試驗法為(+)，占3 %，內(nèi)毒素含量＞0.2ng/ml的70份標(biāo)本中，僅8份家兔熱原試驗法為(+)，占11%。因此，對于大多數(shù)藥物（不包括大輸液和鞘內(nèi)注射液），1ng/ml為人可接受的內(nèi)毒素上限值，以0.1ng/ml作為這些藥物內(nèi)毒素的允許含量有較高的保險系數(shù)<安全系數(shù)為10）。

1980年對17家國際藥廠生產(chǎn)的藥品應(yīng)用家兔熱原試驗及鱟試驗法進(jìn)行了研究，以考察大輸液內(nèi)毒某的允許含量。67份內(nèi)毒素含量為50~200pg/ml的檢品鱟試驗法均為(-)，家兔熱原試驗法(-)的有66份，占98.5%；家兔熱原試驗法(+)者1份，僅占1.5 %；18份內(nèi)毒素含量＞200pg/ml的檢品，17份家兔熱原試驗法(-)，占94%；家兔熱原試驗法(+)者僅1份，占69%。因此內(nèi)毒素含量、鱟試驗法及家兔熱原試驗法三者間在內(nèi)毒素＜200pg/ml時有平行的關(guān)系，因而將100pg/ml（相當(dāng)于1.0ng/kg）作為靜脈大輸液內(nèi)毒素的允許含量是安全的。

2.醫(yī)療器械內(nèi)毒素的允許含量

BMD于1977年11月4日明確指出，鱟試驗法應(yīng)作為醫(yī)療器械內(nèi)毒素檢測的試定方法。此后，HIMA （Health Industry minufactures Association，保健工業(yè)工廠聯(lián)合會）組織了一個合作研究，由生物制品管理局(BOB)下屬的生物測試分局及幾個工廠的試驗室參加。研究結(jié)果推薦0.1ng/ml（10ml/k g）作為醫(yī)療器械內(nèi)毒素的允許含量。對于接觸腦脊液的醫(yī)療器械，內(nèi)毒素的允許含量為0.04ng/ml，因內(nèi)毒素進(jìn)入腦脊液中容易引起毒性反應(yīng)。