凝膠法常用方法之試管法

在凝膠法中，經(jīng)常使用的方法就包括試管法。

那在凝膠法中，試管法的使用方法是怎么樣的呢？

首先需要把供試品和鱟試劑等量加入試管中，輕搖晃使其充分混勻，再將該試管置于水浴中靜置，取出后再觀察該試管的凝膠是否形成。試驗時，需要作試驗管、陽性對照管、陰性對照管及陰性抑制對照管共4種，來作對照試驗。

1.試驗管

需要取出0.1ml的樣本和0.1ml的鱟試劑。水、注射液等一般樣本在試驗前是不需要進(jìn)行處理的，但是如果血液、腹腔滲出液等其他液體就必須在試驗前就進(jìn)行處理，因為這些樣本可能存在鱟試驗法反應(yīng)的抑制物。所用的鱟試劑需要在試驗前就對其以標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素進(jìn)行校準(zhǔn)，且是可以進(jìn)行試驗的。

2.陽性對照管

分別取出0.1ml的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素和0.1ml的鱟試劑，在使用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素是應(yīng)以WHO標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)標(biāo)定。在實驗中應(yīng)用的內(nèi)毒素濃度需要根據(jù)鱟試劑的靈敏度來確定，一般來說，范圍在1～5 ng/ ml即可。

3.陰性對照管

只需取0.1ml的無熱原水和0.1ml的鱟試劑即可。

4.抑制對照管

需要取0.1ml的供試品和0.1ml的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素和0.2ml的鱟試劑。

上述四管均放入37℃孵育1～2小時觀察結(jié)果。如形成凝膠堅固，試管倒轉(zhuǎn)180度不變形，則記為（++）；如混濁度和粘滯性明顯增加，呈膠體狀，但傾斜試管時變形，則記為（+）；如液體流動自如，透明無變化或稍混濁，有少量顆粒細(xì)絮片狀物，則記為（-）。

以上對照的4支試管需要在37℃的環(huán)境中靜置1~2個小時，再對試管進(jìn)行觀察，以此來得出結(jié)果。如果試管中形成的凝膠是凝固的，且將試管翻轉(zhuǎn)180度都不會變形時，則該試管被記為（++）；但是如果試管出現(xiàn)了混濁的情況而且試管內(nèi)還有粘滯性的情況，整體是呈膠體狀的，將試管傾斜時液體也會呈傾斜，則記為（+），如果整個試管的液體是非常流動的，且試管內(nèi)部呈透明色或者只有輕微混濁，且出現(xiàn)了些許顆粒細(xì)絮物，則記為（-）。

如果供試品中出現(xiàn)了抑制物，可以把供試品進(jìn)行處理，比如將其進(jìn)行稀釋，或者用其他方法將抑制物清除，再重新進(jìn)行檢測。如果這些方法都沒有效果的話，還可以采取其他細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法，比如家兔法（Rabbit pyrogen test）。