熱原&細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)Q&A第三期：醫(yī)療器械細(xì)菌內(nèi)毒素限值與測(cè)試方法詳解

在深入檢測(cè)方法的靈活性探討、轉(zhuǎn)換流程的優(yōu)化策略，以及細(xì)菌內(nèi)毒素限值設(shè)定的最新動(dòng)態(tài)后，我們不難發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)在醫(yī)藥和醫(yī)療器械的質(zhì)量控制中扮演著至關(guān)重要的角色。

本期文章將繼續(xù)挖掘細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)領(lǐng)域的細(xì)節(jié)，同時(shí)探討在實(shí)際操作中可能遇到的挑戰(zhàn)與解決方案。通過(guò)本期內(nèi)容的深入剖析，讀者將能更全面地理解細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)的實(shí)踐應(yīng)用與策略優(yōu)化。

Q1：什么時(shí)候采用USP通則151家兔熱原試驗(yàn)是合適的?

對(duì)于某些生物制品，21 CFR 610.13（b）要求進(jìn)行家兔熱原試驗(yàn)。如果根據(jù)21 CFR 610.9 的規(guī)定，證明有與兔熱原試驗(yàn)等效的方法，則可免除21 CFR 610.13（b）中的要求。

對(duì)于人藥和獸藥，某些USP各論仍要求進(jìn)行兔熱原試驗(yàn)。即使有這些專論，如果企業(yè)能證明其熱原檢測(cè)方法與之相當(dāng)，也可以用細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)或替代性細(xì)胞檢測(cè)方法來(lái)替代。FDA將根據(jù)具體情況考慮單核細(xì)胞活化等替代方法。

對(duì)于醫(yī)療器械和藥品物料，公司應(yīng)該評(píng)估非細(xì)菌內(nèi)毒素?zé)嵩嬖诘娘L(fēng)險(xiǎn)。如果風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估顯示非細(xì)菌內(nèi)毒素?zé)嵩赡艽嬖冢捎妹夥嵩瓬y(cè)試應(yīng)該是更恰當(dāng)?shù)摹?/span> 

細(xì)菌內(nèi)毒素含量受到和測(cè)試物品理化性質(zhì)相關(guān)的多個(gè)因素干擾。如果這些干擾因素不能通過(guò)樣品稀釋（最大到MVD稀釋水平）或者其他驗(yàn)證的樣品制備方法來(lái)減少，公司應(yīng)該采用免法熱原測(cè)試。

Q2：對(duì)于適用于多品系動(dòng)物的獸藥，如何確定細(xì)菌內(nèi)毒素限值是合適的?

對(duì)于標(biāo)明可用于多個(gè)物種的獸藥產(chǎn)品，限值應(yīng)以最小物種的最大產(chǎn)品劑量為基礎(chǔ)。如果標(biāo)簽注明產(chǎn)品可用于幼年和成年動(dòng)物，則幼年動(dòng)物被視為最差情況。如果需要用動(dòng)物的體重來(lái)計(jì)算劑量，公司應(yīng)使用該物種的平均體重。

關(guān)于一些動(dòng)物平均體重的清單，請(qǐng)參考FDA指南《WaiversofIn Vivo Demonstration of Bioequivalence o fAnimal Drugs in Soluble Powder Oral Dosage Form Products and Type A Medicated Aricles》。

如需了解該指南中未列出的動(dòng)物體重，請(qǐng)聯(lián)系FDA獸藥中心（CVM,Center for Veterinary Medicine）。

Q3：醫(yī)療器械的細(xì)菌內(nèi)毒素限值是什么?

醫(yī)療器械和放射衛(wèi)生中心（CDRH）采用了以EU/mL為單位的USP細(xì)菌內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)用于醫(yī)療器械提取物限值。USP第<161>章《Transfusion and Infusion Assemblies and Similar Medical Devices》規(guī)定了其范圍內(nèi)醫(yī)療器械的細(xì)菌內(nèi)毒素限值。醫(yī)療器械的細(xì)菌內(nèi)毒素限值取決于設(shè)備的預(yù)期用途和設(shè)備接觸的物品（如血液、心血管系統(tǒng)、腦脊液、鞘內(nèi)給藥途徑、永-久植入設(shè)備和皮下植入設(shè)備）。

對(duì)于直接或間接接觸心血管系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)的醫(yī)療器械，采用下述提取量建議，限值為0.5EU/mL或20EU/每器械。對(duì)于與腦脊液接觸的器械，限值為0.06EU/mL或2.15EU/每器械。對(duì)于直接或間接接觸眼內(nèi)環(huán)境的器械，可能適用較低的細(xì)菌內(nèi)毒素限值。有關(guān)具體建議，請(qǐng)聯(lián)系相應(yīng)的審查部門。

為測(cè)試準(zhǔn)備淋洗液或者萃取液的過(guò)程可能因設(shè)備而異。有些醫(yī)療器械可以沖洗，有些可能需要浸泡，而有些則可能需要拆卸。除非其他藥典標(biāo)準(zhǔn)另有規(guī)定，我們建議的沖洗量包括以下內(nèi)容： 

(1)每10個(gè)測(cè)試樣品應(yīng)該用40ml無(wú)熱原水來(lái)沖洗；

(2)對(duì)于異常小或異常大的器械，在選擇淋洗液或者萃取液體積時(shí)，可將器械與患者接觸的表面積作為調(diào)整因素。細(xì)菌內(nèi)毒素限值可作相應(yīng)調(diào)整。在任何情況下，沖洗/萃取程序都不應(yīng)導(dǎo)致細(xì)菌內(nèi)毒素的稀釋超過(guò)USP<85>中的建議。對(duì)于抑制/增強(qiáng)測(cè)試，淋洗液/取液和器械的淋洗物/萃取物都應(yīng)該進(jìn)行測(cè)試。

用于測(cè)試或者干擾挑戰(zhàn)的醫(yī)療器械的例子，包括包封抗凝劑、包含重金屬或者粒子的器械。在這些情況下,干擾的處理措施可以包括消解、稀釋和緩沖物的添加，離心或者過(guò)濾。

在同一手術(shù)過(guò)程中，或在同一手術(shù)部位放置同一器械時(shí)，同一制造商生產(chǎn)的同一器械的多個(gè)單位通常應(yīng)達(dá)到與手術(shù)過(guò)程中施用的單一器械相同的細(xì)菌內(nèi)毒素限值。如果已知或打算在單個(gè)手術(shù)中使用同一器械的多個(gè)單位，制造商應(yīng)說(shuō)明偏離本指南中確定的總體細(xì)菌內(nèi)毒素限值的理由。

當(dāng)醫(yī)療器械制造商計(jì)劃使用嚴(yán)重偏離本指南或公-認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)的LAL檢測(cè)時(shí)，應(yīng)根據(jù)FDCA第 510（k）條提交上市前通知書「510（k）」，或根據(jù)FDCA第515條提交上市前批準(zhǔn)申請(qǐng)（PMA）補(bǔ)充文件。重大偏離包括但不一定限于：較高的細(xì)菌內(nèi)毒素濃度放行標(biāo)準(zhǔn)，用于抑制/增強(qiáng)測(cè)試的樣品少于3批次，較低的細(xì)菌內(nèi)毒素靈敏度，器械淋洗方案導(dǎo)致細(xì)菌內(nèi)毒素比本指南建議的更大程度的稀釋。

Q4：關(guān)于治療藥品的定期篩選，FDA的期望是什么?

理想情況下，只要在LAL檢測(cè)中不存在干擾/增強(qiáng)特性，就應(yīng)篩查未稀釋的產(chǎn)品。但是，有些產(chǎn)品處方中的成分會(huì)干擾LAL測(cè)試。對(duì)于此類處方，USP建議對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行稀釋，以克服干擾或增強(qiáng)特性。計(jì)算出的 MVD是可以檢測(cè)到細(xì)菌內(nèi)毒素限值的樣品稀釋度，但不應(yīng)作為常規(guī)檢測(cè)稀釋度。當(dāng)產(chǎn)品在開發(fā)過(guò)程中遇到干擾時(shí)，FDA建議制藥公司確定產(chǎn)品最-低稀釋濃度以抵消干擾情況。

FDA建議企業(yè)以略高于中和干擾的產(chǎn)品稀釋度開始后續(xù)的產(chǎn)品篩選。例如，如果產(chǎn)品的MVD為1:100，而產(chǎn)品在1:10時(shí)顯示出抑制作用，但在1:20時(shí)沒有，則最好以1:30的稀釋度篩選產(chǎn)品。如果在這個(gè)水平上檢測(cè)到細(xì)菌內(nèi)毒素，那么企業(yè)就應(yīng)該對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行全面檢查，來(lái)測(cè)量細(xì)菌內(nèi)毒素的準(zhǔn)確數(shù)值。

Q5：細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(CSE)是否仍可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)？

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(CSE)是指除國(guó)際或國(guó)家參考標(biāo)準(zhǔn)以外的細(xì)菌內(nèi)毒素制劑，其校準(zhǔn)可追溯至國(guó)際參考細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)。CSE可以是二級(jí)或三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品，通常由LAL試劑制造商生產(chǎn)和標(biāo)定，用于在規(guī)定的檢測(cè)條件下與特定批次的試劑配合使用。

▲細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(CSE)

CSE已成為制備標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)物和用作化驗(yàn)對(duì)照的公-認(rèn)來(lái)源，為LAL用戶節(jié)省了成本，并有助于保存一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的庫(kù)存。FDA鼓勵(lì)繼續(xù)使用根據(jù)國(guó)際細(xì)菌內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行適當(dāng)校準(zhǔn)的CSE。

細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)領(lǐng)域充滿了挑戰(zhàn)與機(jī)遇，隨著科技進(jìn)步與監(jiān)管要求的持續(xù)更新，其檢測(cè)方法和標(biāo)準(zhǔn)正不斷完善。盡管本期文章已深入解析多個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，但細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)的實(shí)踐應(yīng)用與策略優(yōu)化依然是一個(gè)不斷發(fā)展的過(guò)程。接下來(lái)的文章中，我們將進(jìn)一步挖掘該領(lǐng)域的深度與廣度，探討更多實(shí)際操作挑戰(zhàn)與解決方案，并緊跟最新研究成果和行業(yè)動(dòng)態(tài)，為讀者呈現(xiàn)更多前沿信息與洞見，敬請(qǐng)期待。