鱟試驗(yàn)的方法——比濁法

比濁法又稱濁度測(cè)定法。濁度法系利用檢測(cè)鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過(guò)程中的濁度變化而測(cè)定內(nèi)毒素含量的方法。

Teller等首先報(bào)導(dǎo)將鱟試劑與內(nèi)毒素作用后，可產(chǎn)生凝膠從而使液體呈混濁，其濁度與內(nèi)毒素在一定條件下（內(nèi)毒素濃度20～100pg/ ml)呈線性關(guān)系。此法有如下優(yōu)點(diǎn)①減少了鱟試劑的用量，②快速，③操作簡(jiǎn)便，④半自動(dòng)化。

本試驗(yàn)的方法是:將已適當(dāng)稀釋后的鱟試劑與處理后的被檢標(biāo)本各0.1ml加入微孔中，振顫器振動(dòng)60秒鐘，使兩者充分混勻。放置37℃60分鐘，然后取出在分光光度計(jì)360～380nm處讀取光密度值（OD)。另以系列稀釋的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素作陽(yáng)性對(duì)照，并將其OD值與內(nèi)毒素量間的關(guān)系描成標(biāo)準(zhǔn)曲線。比較試驗(yàn)管與對(duì)照管的OD值，即可知道標(biāo)本中內(nèi)毒素的含量。

在操作中，孵育的時(shí)間是至關(guān)重要的，因?yàn)殡S著時(shí)間的延長(zhǎng)，濁度亦將增加，一般孵育1小時(shí)即可終止其反應(yīng)。即使在室溫中，如時(shí)間過(guò)長(zhǎng)濁度亦會(huì)增加，因此孵育后應(yīng)立即讀取OD值。讀取OD值時(shí)，應(yīng)每隔1分鐘進(jìn)行一次，共四次，取其平均值，變異系數(shù)應(yīng)不超過(guò)1%。

另外，某些注射藥品及放射性藥物本身帶有顏色或濁度時(shí)，必須減去標(biāo)本本身的OD值。